1. cromossoma 2. Plasmídeos

Quando utilizados como vetores, os plasmídeos contêm pelo menos um gene de resistência a antibióticos para selecçnao das bactérias transformadas, um local onde a replicação se inicia e sítios específicos para reconhecimento de enzimas de restrição que cortam e abrem a molécula circular. O fragmento de DNA a ser inserido é preparado de forma a que tenha extremidades coesivas que sejam complementares às criadas pela enzima de restrição. Os plasmídeos abertos e os fragmentos de DNA a inserir são misturados, e pela ação de uma enzima (ligase do DNA) são unidos. Nem todos os plasmídeos se ligam aos fragmentos, alguns tornam a fechar a molecular sem qualquer inserção de novo DNA.

Os plasmídeos com o novo fragmento DNA inserido são introduzidos nas células bacterianas hospedeiras através de um processo denominado por transformação. As bactérias e os plasmídeos são misturados num meio contendo cloreto de cálcio, que torna a parede celular das bactérias permeável, permitindo a passagem do plasmídeo através da parede celular para o citoplasma no interior da célula. Nem todas as bactérias irão receber plasmídeos embora muitas recebam mais de um no seu interior.

Os plasmídeos contêm um gene que lhes confere resistência a antibióticos para além do gene que se introduziu. Adicionando um antibiótico ao meio de cultura vai-se matar qualquer célula que não tenha adquirido plasmídeos, possibilitando uma identificação direta das bactérias modificadas por plasmídeos (caso o gene tenha sido introduzido na zona de resistência ao antibiótico, reconhecem-se as células modificadas pela sua morte na presença do antibiótico). No interior das células hospedeiras, o DNA da bactéria replica-se independentemente dos plasmídeos que também se replicam. Estes mecanismos de replicação independente permite a amplificação de um elevado número de cópias de clones de DNA (em condições ótimas cada célula poderá efetuar cerca de 200 cópias de um plasmídeo).

1. DNA bactéria 2. Plasmídeo 3. Replicação da célula 4. Integração do Plasmídeo no DNA da bactéria

Filme 1. Plasmídeos